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養(yǎng)殖場(chǎng)用非洲豬瘟檢測(cè)試劑盒也可用于環(huán)境檢測(cè)非洲豬瘟試劑盒

更新時(shí)間：2021-01-27

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養(yǎng)殖場(chǎng)用非洲豬瘟檢測(cè)試劑盒也可用于環(huán)境檢測(cè)非洲豬瘟試劑盒由風(fēng)途科技為您供應(yīng)。養(yǎng)殖場(chǎng)用非洲豬瘟檢測(cè)試劑盒也可用于環(huán)境檢測(cè)非洲豬瘟試劑盒均已經(jīng)獲得農(nóng)業(yè)農(nóng)村產(chǎn)品批準(zhǔn)，可以滿足非洲豬瘟核酸現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)需求?？啥靠焖傩竽令惣膊≡\斷如非洲豬瘟、、豬瘟、豬藍(lán)耳、偽狂犬等疾病，廣泛應(yīng)用于養(yǎng)殖場(chǎng)、屠宰場(chǎng)、食品加工廠、肉產(chǎn)品深加工企業(yè)、農(nóng)業(yè)農(nóng)村、畜牧、檢驗(yàn)檢疫單位使用。

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：非洲豬瘟病毒熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒（PCR熒光探針法）

英文名稱：Diagnostic Kit for African Swine Fever Virus （PCR Fluorescence Probing）

［預(yù)期用途］

本試劑盒主要用于檢測(cè)疑似感染豬抗凝血及臨床病料中的非洲豬瘟病毒（ASFV, African Swine Fever

Virus）核酸，適用于非洲豬瘟病毒的檢測(cè)、輔助診斷和流行病學(xué)調(diào)查。

【試劑盒組分】

1、試劑盒組成及貯藏條件

名稱	50 T	貯藏條件
1、反應(yīng)液A	ImL	-20°C
2、反應(yīng)液B	ImL
3、陽(yáng)性對(duì)照	250μL
4、陰性對(duì)照	250μL
5、PCR反應(yīng)液	850μL
6、酶混合液	150μL

2、需自備材料：生理鹽水、無(wú)菌槍頭、熒光PCR反應(yīng)管、記號(hào)筆等。

【操作步驟】

一、樣品制備

1、血液樣品：采集抗凝血（抗凝劑為EDTA）或血清樣品，編號(hào)備用。

2、組織樣品：采集脾臟、肝臟、淋巴結(jié)、扁桃體等病變組織樣品或軟蜱0.1g（黃豆粒大小），眼科剪剪碎于組織勻漿器或研缽中充分勻漿或研磨，再加1mL生理鹽水混勻，4°C條件下8000 rpm/分鐘離心2分鐘，取上清液于滅菌離心管中，編號(hào)備用。

二、DNA提取

取反應(yīng)液A 20μL分別加入到新的1.5mL離心管，加入抗凝而或血清或組織上清液2μL混勻，室溫（20°C左右）靜置3分鐘，加入反應(yīng)液B 20μL,吹打混勻即可，若為抗凝全血，則需8000rpm/分鐘再離心2分鐘后做為待檢DNA溶液。

二、PCR擴(kuò)增

1、配液：取出PCR反應(yīng)液、酶混合液，在室溫*融化后，充分混勻，瞬離，可將酶混合液全取岀直接加入到PCR反應(yīng)液中，充分混勻，瞬離后按每份20μL分裝使用；或按照每份PCR反應(yīng)液17μL, 酶混合液3μL的比例取一定的試驗(yàn)用量，混合兩種反應(yīng)液,瞬離后按照每份20μL分裝到熒光PCR 反應(yīng)管中，剩余試劑立即凍存；（操作過程要注意避光）

2、加樣擴(kuò)增：分別向上述PCR反應(yīng)管中加入5μL樣本 DNA或陰性對(duì)照或陽(yáng)性對(duì)照，混勻并瞬離, 放入熒光PCR儀上運(yùn)行以下程序：

步驟	條件	循環(huán)數(shù)
UNG處理	50°C： 2分鐘	1
預(yù)變性	95°C： 3分鐘	1
預(yù)擴(kuò)増	95°C： 8 秒 55C： 8 秒	5
PCR擴(kuò)增	95°C： 8 秒 55°C： 8 秒	40

　　熒光通道選擇FAM,在40循環(huán)階段每個(gè)循壞的55°C時(shí)收集熒光信號(hào)。設(shè)置擴(kuò)增體系為25μL,同時(shí)要選擇 passive reference 和 quencher 為 none 的模式。

　　(注:若熒光PCR儀(如ABI7500)按說(shuō)明書中的反應(yīng)程序設(shè)置后因持溫時(shí)間短無(wú)法運(yùn)行,可將預(yù)擴(kuò)增和PCR擴(kuò)增條件變更為95°C： 5秒 55°C：30秒。)

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